白细胞五分类染色试剂的开发
150万 获批时间:2023年01月01日
公司项目, 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院, AIEI2023CK013
血细胞分为红细胞(Red Blood Cell ,RBC)、白细胞(White Blood Cell ,WBC)、血小板(Platelet,PLT)三类细胞,血常规检查时经常需要检测白细胞分类及数量、红细胞数量和血小板数量。正常外周血中的白细胞通常可分为五类,即淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。正常外周血中的红细胞包括成熟红细胞和少量网织红细胞(reticulocyte,RET)。目前基于核酸检测的全自动血细胞分析仪对血细胞分类检测主要在三个通道内进行的,分别是DIFF通道,RET通道和NRBC通道。主要利用半导体激光流式细胞术、核酸荧光染色技术对血细胞进行分类。其中DIFF四分群通道主要对白细胞进行分类检测,采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板,白细胞膜仅部分溶解。核酸荧光染料进入白细胞内,使DNA、RNA和细胞器着色。因为荧光强度与细胞内核酸含量成比例,所以未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色深,成熟白细胞荧光染色浅,从而得到DIFF(四分群)白细胞散点图;不同白细胞核酸含量有细微的差别,红细胞在逐渐发育成熟的过程中RNA含量逐渐减少直至消失。网织红细胞是红细胞的未成熟阶段,是反映骨髓红系造血功能以及判断贫血和相关疾病疗效的重要指标。骨髓中红细胞系统的增生发育过程是:多能干细胞→单能干细胞→原始红细胞→早幼红细胞→中幼红细胞→晚幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞。从原始红细胞增殖到晚幼红细胞阶段共分裂3-4次,约需72小时,红细胞数由一个变为8-16个,细胞核由大变小而浓缩,胞浆中含血红蛋白逐渐增多。晚幼红细胞以后细胞即不再分裂,发育过程中核被排出而成为网织红细胞。网织红细胞含有少量核糖核酸RNA,用煌焦油蓝染色时成网状故名网织红细胞。网织红细胞进一步成熟,RNA消失而为成熟红细胞。从晚幼红细胞发育到成熟红细胞约需48小时,成熟红细胞的寿命约为120天。在正常情况下骨髓中有核红细胞并不释放至血循环,只有网织红细胞和成熟红细胞才释入血中。因此,检查末梢血中网织红细胞数,可以推知骨髓生红细胞的情况。RET通道主要对红细胞进行分类检测,其检测机理在于荧光染料将未成熟红细胞中的大量残存核酸染色,用流式细胞术的原理进行检测。被荧光染色的网织红细胞根据荧光强度的强弱分类为四部分:HFR(高荧光强度网织红细胞比率)、MFR(中荧光强度网织红细胞比率)、LFR(低荧光强度网织红细胞比率)、RBC(红细胞)。分类为HFR、MFR、LFR的红细胞称为网织红细胞,特别是分类为HFR、MFR的网织红细胞作为IRF(未成熟网织红细胞指数)计数。另外,分类为RBC的红细胞作为成熟红细胞计数。采用AIE荧光核酸染色技术,利用AIE分子斯托克位移大的特点或许可以整合DIFF通道和RET通道,减少检测步骤,节约检测时间,提高检测效率。